Applications

Transparisation des échantillons

FLO-400 : Dispositif de recherche sûr, rapide et simple d’utilisation.

Des embryons transparents, la technique de la transparisation

Les techniques de transparisation (Clearing) sont utilisées en biologie pour rendre des échantillons initialement opaques en des échantillons transparents. Elles consistent à remplacer certains tissus opaques comme les graisses présentes dans les échantillons, par différents réactifs totalement transparents. Le but est de réussir à rendre l’échantillon biologique transparent tout en conservant sa forme et sa taille et en empêchant la perte de la fluorescence présente au cœur des cellules mutées.

Bien que différents protocoles sont apparus les uns après les autres au cours des dernières années, la complexité de certains les ont rendus extrêmement compliqués à utiliser dans des conditions de laboratoire notamment par l’utilisation de réactifs nocifs.

Nous avons étudié l’utilisation de 6 protocoles différents pour en adapter 3 sur notre automate Flo400.

Le plus rapide, le 3DISCO :

Ce protocole est le plus court puisque la durée totale actuelle pour le réaliser sur notre automate est de 14 heures. après un passage de tétrahydrofurane à concentration croissante dans les échantillons, le dichlorométhane et le di-benzyléther viennent stabiliser les échantillons jusqu’à obtenir es échantillons totalement transparents. Ce Protocole permet de conserver les tailles des embryons mais également les marquages fluorescents obtenus après Immunohistochimies. Attention cependant, Le Tetrahydrofurane est un réactif hautement toxique et nécessite d’être manipulé sous hotte. De plus, ce composé détruit certains plastiques tels que le polypropylène, Il vous faudra donc utiliser des tankers en polystyrène.

Le ClearT2, pour conserver les proportions :

Ce protocole est très efficace pour la clarification des échantillons contenants des cellules mutées fluorescentes. En effet, en 16 heures seulement,votre échantillon devient totalement transparent et conserve intégralement l’expression de la fluorescence dans les cellules voulues. De plus, ce protocole conserve les dimensions de votre échantillon de façon complète. Il conserve également les immunomarquages fluorescents. Il utilise cependant du Formamide qui est un composé nocif et nécessite donc d’être utilisé sous hotte. De plus, la transparence de l’échantillon n’est stable que durant un à deux jours avant de redevenir opaque (cependant, un autre passage dans le protocole ClearT2 le fait redevenir transparent.)

Le SeeDB, le moins nocif et le plus économique :

Ce protocole, un peu plus long que les 2 autres (24 heures avec le Flo 400, 96 en manuel) est le plus économique et le moins nocif des trois. Il consiste à incorporer une solution de fructose à concentration croissante petit à petit dans l’échantillon. Les solutions sont composées uniquement de fructose et de α-thioglycérol (produit irritant) qui prennent la place des acides gras présents et rendent l’embryon transparent. Avec ce protocole, la transparence et la fluorescence sont conservées durant plus de 3 semaines si les échantillons sont mis à l’obscurité. Actuellement, Flogentec dispose du record de durée de clarification par ce protocole.

Ces trois protocoles (SeeDB, 3DISCO et ClearT) ont été adaptés par notre équipe pour vous permettre de clarifier vos échantillons en toute simplicité et de façon totalement automatique. Les performances offertes par le Flo 400 vous permettent de clarifier plus de 50 échantillons en un seul protocole en diminuant considérablement la quantité de réactifs nécessaires grâce à son système de flux recyclés.

L’automate Flo400 peut également effectuer les techniques :

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FLO400

Vue d’ensemble

La recherche en biologie ne cesse de se diversifier et de se complexifier par l’apparition des nouvelles technologies et par l’accumulation des connaissances. Ainsi, différents domaines d’application et d’expériences en biologie émergent et de nouvelles techniques de biologie à haut débit arrivent.

L’hybridation in situ, l’immunohistochimie et l’hybridation in situ en fluorescence sont des méthodes de marquage qui apportent une compréhension claire de l’expression de chaque gène dans un cadre spatial et temporel au sein d’un échantillon donné. Cela permet une caractérisation du protéome ou du génome de  l’organisme étudié.

La société Flogentec propose ainsi des automates de biologie pouvant avoir plusieurs applications différentes suivant votre domaine de recherche.

En bref

Informations FLO-400

FLO-400 est un dispositif de laboratoire indispensable pour l’hybridation in situ en 3D et l’immunohistochimie. Il réduit le temps d’analyse à 22 heures contre 96 heures avec un outil traditionnel.

SONDES

4 sondes différentes peuvent être utilisées simultanément (1 par Flow Cell). On peut disposer des paniers afin de multiplier le nombre d’embryons à analyser.

RECYCLAGE

Processus de recyclage : les anticorps et les sondes ARN sont recyclés et peuvent être beaucoup plus dilués ou réutilisés pour d’autres expériences.

Flux constant

Flux constant de réactif : Les échantillons biologiques en 3D sont soumis en permanence à un flux de solvant qui assure de bonnes condtions dans l’expérience.

Logiciels

Logiciel de laboratoire facile d’utilisation : un logiciel efficace et ergonomique. Ce logiciel permet de programmer le processus d’analyse et de voir les résultats.

Notre gamme de

FLO400

Le Flo400 est un dispositif de recherche sûr, rapide et facile d’utilisation, qui permet d’analyser des échantillons 3D par la méthode de l’hybridation in situ et de l’immunohistochimie. Grâce à cet équipement, on peut visualiser directement la localisation et l’activation des gènes dans les cellules concernées. Le moyen employé pour cette localisation est l’hybridation in situ (HIS) des sondes ARN (analyse du transcriptome). Notons que l’automate permet également une analyse du protéome par immunohistochimie, en utilisant des anticorps à la place des sondes ARN.

Flo400 W

Automate Flo400 Wholemount : Cet automate ISH/IHC pour échantillons in toto est spécialisé pour la recherche en biologie.

Flo400 S

Automate Flo400 Slide : Cet automate ISH/IHC pour échantillons sur lame est conçu pour la recherche en biologie et le diagnostic.

Flo400 C

Automate Flo400 Combo : Cet automate ISH/IHC pour tout type d’échantillons est spécialisé pour la recherche en biologie.